Sebelum eksperimen, semua reagen dan sampel hendaklah diseimbangkan dengan suhu bilik; selepas pencairan semula, sampel hendaklah disentrifugasi semula dan mengambil supernatan untuk ujian; untuk reagen atau penyediaan sampel, campurkan dan elakkan berbuih; penentukuran dan sampel disyorkan untuk ujian pendua.

1. Tambah ple: tambah penyelesaian kerja standard kepada dua telaga pertama secara bergilir-gilir, dan tambah dua lubang untuk setiap kepekatan penyelesaian kerja, 100 μ L setiap telaga. Sampel yang akan diuji ditambah ke telaga lain, 100 μ L setiap telaga (untuk kepekatan sampel melebihi julat ujian, sampel dicairkan dengan standard & pencairan sampel). Plat mikro disaluti filem dan diinkubasi pada 37 ℃ selama 90 min. Petua: Apabila menambah sampel ke bahagian bawah plat mikro, cuba jangan sentuh dinding lubang, goncang dan gaul perlahan-lahan, untuk mengelakkan menjana buih. Masa tambahan perlu dikawal dalam masa 10 minit.

2. Antibodi/antigen terbiotinilasi: buang cecair, dan goncang hingga kering, tanpa membasuh.100 μ L larutan kerja antibodi/antigen terbiotinilasi segera ditambah ke dalam setiap telaga, bercampur, mikroplate ditambah bersalut filem, dan diinkubasi pada 37 ℃ selama 1 jam.

3. Mencuci: goncang cecair di dalam lubang, tambah 350 μ L cecair pencuci pada setiap perigi, rendam selama 1-2 minit, sedut atau goncang cecair dalam plat mikro, dan keringkan pada kertas penyerap tebal. Ulangi langkah pinggan basuh ini sebanyak 3 kali. Petua: Mesin basuh boleh digunakan di sini dan dalam langkah basuh yang lain. Setiap langkah mencuci adalah penting untuk eksperimen.

4. Konjugat enzim HRP: 100 μ L larutan kerja konjugat enzim setiap telaga, dicampur, disalut dengan filem, dan diinkubasi pada 37 ℃ selama 30 minit.

5. Mencuci: buang cecair di dalam perigi, dan basuh pinggan 5 kali dengan cara yang sama seperti langkah 3.

6. Substrat: tambah 90 μ L larutan substrat (TMB) pada setiap perigi, gaul rata, tambah salutan filem, dan eramkan pada suhu 37 ℃ selama kira-kira 15 minit. Nota: Masa pengeraman hendaklah dipendekkan atau dilanjutkan mengikut situasi perkembangan warna sebenar, tetapi tidak melebihi 30 minit. Ia boleh ditamatkan apabila kecerunan yang jelas muncul dalam lubang standard.

7. Penamatan: Tambah 50 μ L larutan penamatan kepada setiap telaga untuk menamatkan tindak balas. Nota: susunan penambahan larutan penamatan hendaklah sama dengan susunan larutan substrat.

8. Baca: Segera ukur ketumpatan optik (OD) setiap telaga pada 450 nm dengan pembaca plat mikro. Pembaca plat mikro hendaklah dibuka lebih awal untuk menyediakan prosedur ujian.

9. Selepas eksperimen, masukkan semula reagen yang tidak digunakan ke dalam peti sejuk mengikut suhu penyimpanan yang ditetapkan sehingga jangka hayat.