Sebagai bahan tambahan dalam eksperimen pengesanan ELISA, Enzim pinggan memainkan peranan yang menentukan dan secara langsung mempengaruhi keputusan eksperimen akhir. Kualiti yang Plat enzim bergantung terutamanya pada kepekaannya terhadap penjerapan protein, perbezaan kapasiti penjerapan protein antara plat dan lubang, dan perbezaan antara kelompok yang dibeli. plat enzim . Oleh itu, memilih satu plat enzim produk dengan sensitiviti penjerapan protein yang tinggi, perbezaan kecil antara lubang kapasiti penjerapan protein, dan perbezaan kecil antara kelompok adalah jaminan bagi penguji untuk mendapatkan keputusan eksperimen yang boleh dipercayai dan stabil.

Plat enzim klasifikasi: mengikut piawaian klasifikasi yang berbeza, pinggan ada klasifikasi yang berbeza.

1: Mengikut bilangan lubang, ia boleh dibahagikan kepada 96 lubang, 48 lubang, dll. Kerana plat enzim digunakan terutamanya dengan pembaca plat mikro, yang pinggan meter di pasaran adalah paling banyak 96 lubang, jadi plat mikro ialah 96 lubang.

2: Mengikut bahagian bawah yang berbeza, ia dibahagikan kepada bahagian bawah rata, bahagian bawah U, bahagian bawah V, dll.

Indeks biasan tapak rata adalah rendah, yang sesuai untuk pengesanan dalam plat mikro;

T Indeks biasan plat mikro U adalah tinggi, mudah untuk pensampelan, pensampelan dan pencampuran, dan boleh memerhatikan perubahan warna secara langsung tanpa meletakkannya di atas plat mikro, untuk menentukan sama ada terdapat tindak balas imun yang sepadan.

Plat mikro asas V boleh menyerap sampel dengan tepat.

3: Mengikut kebolehan pengikatan yang berbeza bagi plat mikro dan protein dan molekul lain, ia dibahagikan kepada daya pengikatan tinggi, daya pengikatan sederhana, dan aminasi.

(1) Daya pengikat yang tinggi

Selepas permukaan mikroplat ini, keupayaan mengikat proteinnya sangat dipertingkatkan, sehingga 300~400ng IgG / cm2, dan berat molekul protein terikat utama ialah> 10 kD. Penggunaan kelas mikroplat ini boleh meningkatkan sensitiviti, dan boleh mengurangkan kepekatan dan jumlah protein bersalut secara relatif, yang lebih mudah untuk menghasilkan tindak balas tidak spesifik. Selepas salutan dengan antigen atau antibodi, detergen bukan ionik tidak dapat mengelak tapak protein tidak terikat dengan berkesan, dan protein harus digunakan sebagai agen pengedap.

(2) Daya pengikat sederhana

Plat mikroplat tersebut secara pasif mengikat protein melalui ikatan hidrofobik pada permukaan, dan sesuai sebagai pembawa fasa pepejal untuk protein makromolekul dengan berat molekul> 20 kD, dengan kapasiti mengikat protein 200 hingga 300 ng IgG / cm2. Disebabkan oleh ciri-ciri satu-satunya pengikatannya kepada makromolekul, ia sesuai untuk pembawa fasa pepejal sebagai antibodi atau antigen yang tidak ditulen untuk mengurangkan potensi kereaktifan silang tidak spesifik. Plat boleh menjadi protein lengai atau detergen bukan ionik sebagai penyelesaian pengedap.

(3) Aminasi

Plat mikro ini selepas pengubahsuaian permukaan mempunyai kumpulan amino bercas positif, yang ikatan hidrofobiknya digantikan oleh ikatan hidrofilik. Kelas mikroplat ini sesuai sebagai pembawa fasa pepejal untuk protein molekul kecil. Menggunakan penimbal dan pH yang sesuai, permukaan mengikat molekul kecil bercas negatif melalui ikatan ionik. Oleh kerana sifat hidrofilik permukaannya dan keupayaannya untuk terikat secara kovalen oleh penyambung silang lain, ia boleh digunakan untuk menetapkan molekul protein yang larut dalam agen penyahcemaran seperti Triton-100, Tween 20, dll. Kecacatan plat ini ialah kerana hidrofobisiti berkurangan; lebih-lebih lagi, permukaan perlu ditutup dengan berkesan. Oleh kerana sifat permukaan hidrofilik dan kovalen, penyelesaian pengedap yang digunakan mesti boleh berinteraksi dengan mana-mana kumpulan berfungsi dalam kumpulan amino tidak reaktif dan penyambung silang yang dipilih.

4. Mengikut warna boleh dibahagikan kepada lutsinar, hitam, dan putih.

Lutsinar ialah yang paling biasa digunakan untuk eksperimen imunisasi berkaitan enzim yang paling umum. Berbeza dengan plat mikro lutsinar, terdapat juga plat mikro legap untuk pengesanan bercahaya, umumnya hitam dan putih. Plat mikro hitam itu sendiri mempunyai penyerapan cahaya, jadi isyaratnya jauh lebih rendah daripada plat mikro putih, jadi ia biasanya digunakan untuk mengesan cahaya yang kuat, seperti pengesanan pendarfluor. Plat mikro putih digunakan untuk pengesanan cahaya yang lemah, selalunya digunakan untuk chemiluminescence am. Di samping itu, mikroplat hitam juga boleh melemahkan masalah tindak balas tidak spesifik. Pada masa yang sama, adalah penting untuk ambil perhatian bahawa dengan mikroplat umum tidak boleh pengesanan bercahaya, kerana cahaya yang dipancarkan daripada tindak balas chemiluminescence adalah isotropik, jika, dengan mikroplat telus, cahaya bukan sahaja akan merebak dari arah menegak, tetapi juga dari arah mendatar, membuat cahaya dengan mudah melalui jurang antara lubang dan dinding lubang, mengakibatkan cahaya nilai penyerapan cahaya lubang dipengaruhi oleh lubang bersebelahan yang dipancarkan cahaya.

Plat mikro yang baik hendaklah mempunyai prestasi penjerapan yang baik, nilai kosong yang rendah, ketelusan tinggi bahagian bawah lubang, dan prestasi yang serupa antara plat dan antara lubang plat yang sama. Disebabkan oleh perbezaan dalam bahan mentah dan perbezaan dalam proses pengeluaran, kualiti pelbagai produk adalah sangat berbeza, oleh itu, prestasi setiap kelompok plat mikro mesti diperiksa terlebih dahulu sebelum digunakan. Kaedah pemeriksaan yang biasa digunakan ialah kepekatan tertentu IgG manusia (biasanya 10 ng/ml) yang disalut dengan perigi plat ELISA, selepas mencuci, menambah pencairan yang sesuai antibodi IgG anti-manusia berlabel enzim untuk setiap telaga, mencuci selepas pemeliharaan haba, menambah warna substrat, menghentikan tindak balas enzim, dan mengukur penyerapan larutan dalam setiap telaga masing-masing. Keadaan tindak balas dikawal supaya bacaan setiap telaga dikekalkan pada penyerapan sekitar 0.8. Purata jumlah bacaan telah dikira. Perbezaan antara min semua bacaan individu dan semua bacaan hendaklah kurang daripada 10%. Tiga plat mikro berikut ialah A, B, dan C sebagai contoh.

Kaedah langsung: untuk mengesan penjerapan IgG Manusia pada permukaan mikroplat

Kaedah sandwic antibodi berganda: antigen dalam serum positif untuk antibodi anti-manusia

Seperti yang dapat dilihat dari rajah di atas, dalam ketiga-tiga jenis plat enzim bio ini, mikroplat kelas A mempunyai kesan penjerapan protein yang lebih baik, tetapi juga meningkatkan sensitiviti penjerapan protein, yang boleh memberikan data eksperimen yang lebih dipercayai. Di samping itu, anda boleh bertanya tentang plat perbezaan kumpulan. Berikut ialah perbezaan kumpulan plat tertentu. Seperti yang dapat dilihat daripada carta data perbezaan dalam kelompok, plat mikro mempunyai kestabilan antara kelompok yang baik, dan perbezaan pekali variasi (CV) dalam kelompok adalah sekitar 5.0%, yang jauh lebih rendah daripada pekali variasi dalam kelompok. di bawah 10.0% dalam standard kawalan kualiti untuk tindak balas imun klinikal. Oleh itu, maka ia juga sesuai untuk eksperimen ELISA.