R ecovery

1. Keluarkan tiub beku daripada nitrogen cecair dan segera ke dalam tab mandi air 37℃, goncang sedikit. Selepas cecair cair (kira-kira 1-1.5 minit), keluarkan sedikit alkohol dan letakkan di atas meja kerja ultra-bersih.

2. Masukkan ampaian sel ke dalam tiub emparan 15ml dengan medium 10ml (basuh tiub beku dengan medium dan cuci semua sel yang melekat pada dinding) dan sentrifuge pada 1000 selama 5 minit.

3. Supernatan diterbalikkan dan 1ml medium ditambah untuk menggantung sel. Asap ke dalam pinggan 10cm dengan 10 ml medium dan goncang perlahan-lahan ke kiri dan kanan untuk mengagihkan sel-sel dalam hidangan secara merata.

4. Tandakan jenis sel dan tarikh, nama manusia, dan sebagainya, masukkan ke dalam inkubator CO2, lekatkan sel dan tukar medium.

5. Medium ditukar setiap 3 hari sekali.

P assage

1. Tumbuhan telah diluluskan untuk mencapai liputan 80-90%.

2. Abup medium asal .

3. Tambah trypsin yang sesuai (tutup sel sahaja) dan hadam selama 1-2 minit .

4. Pencernaan telah ditamatkan dengan menambah jumlah yang sama bagi medium yang mengandungi serum .

5. Tiup sel dengan pistol pipet dan biarkan semuanya digantung.

6. Sel telah disedut ke dalam tiub emparan 15ml dan disentrifugasi pada 1000 selama 5 minit.

7. Tuangkan supernatan dan tambah 1-2ml medium untuk meniup semua sel.

8. Sel telah dihantar ke beberapa hidangan kultur bergantung kepada spesies sel. Secara amnya, sel kanser dibahagikan kepada 5 sel dan tiga sel normal dihantar. Teruskan bercucuk tanam.

Bebas untuk mencerna sel dan mengemparnya (ibid. di atas).

Gantung sel dengan penyelesaian penyimpanan beku yang dipadankan, bahagikannya ke dalam tiub penyejuk beku yang disterilkan, rehatkan selama beberapa minit, dan nyatakan jenis sel dan tarikh penyimpanan beku.4℃ 30min, -20℃ 30min, -80℃ semalaman dan kemudian disimpan dalam perfusi nitrogen cecair.

Penyediaan penyelesaian cryopreservation: 70% sederhana 20% FBS 10% DMSO. DMSO hendaklah ditambah perlahan-lahan dan digoncang secara berterusan.